Perché usiamo un controllo negativo in PCR?

Perché usiamo un controllo negativo in PCR?
Anonim

Risposta:

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Spiegazione:

La PCR funziona con un DNA modello. Diciamo che stai testando l'HIV (l'HIV è un virus a RNA, ma quando entra in una cellula, si trasforma in DNA …. quindi ci sarà il DNA dell'HIV in una cellula infetta). I primer utilizzati genereranno un prodotto (amplicone) che corrisponde a una parte del DNA dell'HIV. Se vedi questo amplicone, allora hai la sequenza dell'HIV presente ….. ma se non hai un controllo negativo, potresti avere una contaminazione.

La PCR è estremamente sensibile. Ci sono molte soluzioni usate nella PCR (acqua, tampone, dNTP, enzima) … e tutte possono facilmente essere contaminate con DNA da altri campioni, o anche dall'amplicone che è stato fatto nella reazione che hai fatto ieri. Quindi se hai un campione di DNA di Patient X e stai controllando l'HIV mediante PCR, i primer per PCR possono ricavare un prodotto dal DNA dell'HIV nel campione di DNA del paziente X (se tale persona ha l'HIV), oppure può farlo fuori contaminazione. Ma non si può dire se proviene dalla contaminazione o dall'HIV nel DNA dei pazienti.

Quindi esegui un controllo dell'acqua. Il tubo 1 posiziona tutti i componenti della reazione e per il DNA aggiungi solo acqua. Questo è il controllo negativo. NIENTE dovrebbe amplificare qui. In Tube 2 metti tutti i componenti della reazione e il DNA del paziente X. Se si ottiene un prodotto qui, (e nulla nel tubo 1), il paziente X probabilmente ha il DNA dell'HIV nel suo DNA. Se si ottiene un prodotto sia in Tube 1 che in Tube 2, si ha un problema di contaminazione e non si può sapere se l'HIV nel campione del paziente proviene dalla malattia o dalla contaminazione.

Quindi esegui sempre un controllo dell'acqua (acqua al posto del DNA).