Perché GAPDH è utilizzato in Western Blot? + Esempio

Perché GAPDH è utilizzato in Western Blot? + Esempio
Anonim

Risposta:

GAPDH è spesso usato come controllo del caricamento.

Spiegazione:

In Western blotting utilizziamo spesso GAPDH come controllo di caricamento. Ciò significa che analizzando GAPDH possiamo verificare che abbiamo una quantità equivalente di proteine caricate su diverse corsie della macchia.

Un esempio di utilizzo: diciamo che abbiamo una malattia che riteniamo causi un'elevazione di una particolare proteina nella cellula. Potremmo creare un campione da cellule "sane" e un altro campione da cellule "malate". Caricheremo quindi quantità di proteine equivalenti di entrambi i campioni su un gel per il Western blot.

Dopo aver sondato la macchia per la nostra proteina di interesse, scopriamo che nelle cellule malate il livello di proteina è effettivamente elevato (cioè una banda più scura è prodotta sulla macchia). Per dimostrare che questo aumento di proteine è dovuto a un cambiamento di espressione nella cellula, invece di un artefatto di caricamento (cioè, la banda più istante è causata da un cambiamento nell'espressione proteica nelle cellule, e non da noi caricando accidentalmente di più del campione "malattia" rispetto al "sano") vorremmo anche sondare la macchia per GAPDH per mostrare che i livelli di proteine totali sono gli stessi in entrambe le corsie.

Quindi, facendo questo, stiamo dimostrando che una proteina equivalente è stata caricata nelle due corsie e che il cambiamento nell'intensità della banda che stiamo osservando è dovuto ai cambiamenti nell'espressione della proteina per la proteina di interesse.