Cos'è lo scambio ionico con cromatografia? + Esempio

Cos'è lo scambio ionico con cromatografia? + Esempio
Anonim

Risposta:

È un processo per separare diverse proteine in base alla loro carica e alle proprietà leganti di un materiale.

Spiegazione:

A diversi pH diverse proteine portano cariche diverse. Posizionando una miscela di proteine a un pH impostato è possibile avere una miscela che contiene proteine con proprietà di carica diverse.

Se questa miscela di proteine viene versata su una colonna che contiene un materiale con una carica su di essa, la colonna legherà le proteine con una carica opposta.

È quindi possibile utilizzare diverse soluzioni contenenti diverse quantità di ioni per eluire (staccare) le proteine dalla colonna.

Ad esempio, supponiamo tu abbia una miscela di proteine da cui desideri purificare una particolare proteina. Se tu sapessi che ad un particolare pH la tua proteina di interesse era carica positivamente potresti versare la miscela su una colonna che conteneva materiale caricato negativamente.

Tutte le proteine che non portavano una carica o quando erano caricate negativamente fluivano direttamente attraverso la colonna. Potresti quindi rilasciare la tua proteina carica positivamente allagando la colonna con ioni positivi che completerebbero la carica negativa sulla colonna. Questa competizione causerebbe quindi l'eliminazione della proteina di interesse.

Ecco un esempio di questo accadendo.

Ogni vassoio contiene un tampone a una concentrazione diversa e, come si può vedere nel campione di 175 mM (angolo in alto a sinistra), una piccolissima proteina rosso / marrone si lega alla membrana carica in quanto vi è stata competizione tra gli ioni nel tampone e proteina per i siti di legame caricati sulla membrana (Gli ioni nel buffer hanno "vinto" perché ce ne sono più di così e così hanno impedito alla proteina di legarsi). Nel campione in basso a destra un sacco di proteine si lega alla membrana perché ci sono meno ioni presenti per competere per i siti di legame.

In questo video è possibile vedere la cromatografia a scambio di anioni in funzione: