Perché gli enzimi di restrizione sono conservati in una soluzione di glicerolo al 50%?

Perché gli enzimi di restrizione sono conservati in una soluzione di glicerolo al 50%?
Anonim

Risposta:

Per mantenerli intatti …

Spiegazione:

Restrizione Gli enzimi vengono utilizzati in quantità MOLTO piccole, ma in genere vengono acquistati in lotti leggermente più grandi.

Se non altro, di solito preferisci fare diversi test con lo stesso lotto. Il lotto acquistato deve quindi essere conservato per un periodo di tempo prolungato.

La maggior parte degli enzimi sono perfettamente felici nel loro buffer a 4 gradi Celsius per un po ', ma alla fine si degraderanno. Solitamente 24 ore sono il limite consentito.

Per la conservazione a lungo termine, il lotto deve essere congelato. -20C è lo standard e lo manterrà per diversi mesi. Per periodi anche più lunghi (ad esempio uno o più anni) -70C è la norma.

È necessario congelarlo rapidamente e in piccoli contenitori (ad es. Eppendorf) per evitare di scongelare / congelare troppo spesso.

Per evitare danni alle proteine a temperature così basse, è possibile / devono essere aggiunti stabilizzanti come DTT (Di-tio-Treitol), albumina sierica e, soprattutto, glicerolo (5-50%)

Stranamente, a -20C è necessario usare il 50% di glicerolo, mentre a -70 la glicerina non è realmente necessaria, anche se l'aggiunta di essa può aiutare a stabilizzare la proteina ….