Nel test ELISA, cosa fanno gli anticorpi primari e gli anticorpi secondari?

Nel test ELISA, cosa fanno gli anticorpi primari e gli anticorpi secondari?
Anonim

Risposta:

Questo dipende dal tipo di saggio ELISA.

Spiegazione:

ELISA = Dosaggio immunoassorbente collegato all'enzima.

Esistono diversi tipi di test ELISA. Quello che ti serve è:

  • anticorpo con un enzima ad esso collegato
  • antigene a cui si lega l'anticorpo
  • substrato dell'enzima che provoca una reazione misurabile

Il enzima attaccato all'anticorpo è spesso HRP (perossidasi di rafano). HRP può reagire con diversi substrati che cambiano colore o emettono luce, entrambi misurabili.

L'immagine mostra una panoramica del tipi diversi di saggi ELISA. Spiegherò come funzionano sotto.

ELISA diretto

Un piatto è rivestito con l'antigene (Ag) e a anticorpo primario con l'enzima è aggiunto. Quando viene aggiunto il substrato, la reazione si verificherà ed è proporzionale alla quantità di interazioni antigene-anticorpo.

ELISA indiretto

Ancora una volta, una piastra è rivestita con l'antigene e a anticorpo primario si lega all'antigene. UN anticorpo secundario viene aggiunto che si lega al primo anticorpo. Il 2 ° anticorpo contiene l'enzima che reagisce con il substrato.

Sandwich ELISA

Qui sono coinvolti due o tre anticorpi. Un anticorpo di cattura è attaccato alle piastre e si lega all'antigene. Seguono gli stessi passaggi del metodo diretto (solo un anticorpo) o indiretto (due anticorpi).

ELISA competitivo

A volte chiamato ELISA di inibizione, è un po 'più complicato. Un piatto è rivestito con l'antigene da ricercare. UN anticorpo primario con l'enzima viene prima incubato con un campione con una concentrazione sconosciuta dello stesso antigene. Questo viene quindi aggiunto alla piastra, consentendo agli anticorpi che sono ancora liberi di reagire con l'antigene sulla piastra. Dopo che i complessi antigene-anticorpo del campione sono stati lavati via il substrato è stato aggiunto.

Quando il campione sconosciuto ha un sacco di antigene, ci sarà meno anticorpi liberi di legarsi alla piastra = segnale inferiore.