Perché la macchia occidentale è usata per confermare l'elisa? + Esempio

Perché la macchia occidentale è usata per confermare l'elisa? + Esempio
Anonim

Risposta:

Tipicamente questo è un test di specificità anticorpale.

Spiegazione:

In un test ELISA è molto difficile dire se il tuo anticorpo sia o meno vincolante per la tua proteina di interesse, una proteina completamente diversa o una gamma di proteine.

Il Western blot verrà utilizzato per verificare la specificità dell'anticorpo (si dovrebbe notare che il Western blot potrebbe non rilevare tutte le reazioni incrociate con proteine errate).

Nel Western blot, puoi vedere la dimensione della proteina a cui l'anticorpo è vincolante (non puoi farlo in un ELISA). Pertanto, ad esempio, se l'anticorpo dovesse legarsi a una proteina di 56 kDa e si vede una fascia a ~ 56 kDa sulla macchia, allora si può ragionevolmente essere sicuri che l'anticorpo si lega alla proteina corretta.

Se, d'altra parte, hai visto una banda a 32 kDa, potresti concludere che l'anticorpo si lega alla proteina sbagliata. Allo stesso modo, se sul Western Blot emergessero molte bande, ciò suggerirebbe (in assenza di degradazione della proteina) che l'anticorpo si legasse a una gamma di proteine diverse.

Nell'esempio della banda 32 kDa che appare sul gel, e anche delle bande multiple, suggerirebbe che l'anticorpo manchi di specificità per l'ELISA e che qualsiasi risultato visto nell'ELISA potrebbe non essere specifico per la proteina di interesse.

Se fossi sottoposto a questo tipo di test, potrei includere una sorta di reagente "interferente" per testare l'anticorpo. Per esempio, se avessi alzato il mio anticorpo verso un peptide, potrei includere il peptide nella soluzione di anticorpi primaria per verificare il corretto legame. Cioè, in presenza del peptide non dovrei vedere alcuna banda o nessun risultato dall'ELISA poiché il mio anticorpo primario non sarebbe in grado di legarsi a causa della presenza di un eccesso del peptide.